夫妻二人体验交换夫妻的后果_破外女13一14在线观看_欧美AV人人妻AV人人爽苍井空_张开腿让我尿在里面(H)

　　用lip2000脂質體2000進行轉染時，首先需要優化轉染條件，應找出該批LR對轉染某一特定細胞適合的用量、作用時間等，對每批LR都要做。先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間，DNA可從1-5ug和孵育時間6h，開始，按這兩個參數繪出相應LR需用量的曲線，再選用LR和DNA兩者*的劑量，確定出轉染時間。因LR對細胞有一定的毒性，轉染時間以不超過24h為宜。COS-7、BHK、NIH-3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。

　　lip2000脂質體2000的轉染方法常見有兩種，具體如下：

　　一、快速lip2000脂質體2000轉染法操作步驟

　　(1)將細胞以5 x 10^5個/孔接種于6孔板中培養24h，使其達到50%-60%板底面積。在試管中配制DNA-脂質體復合物。

　　a、在1ml無血清DMEM中稀釋PSV1-neo質粒DNA或供體DNA。

　　b、旋轉1s，再加入脂質體懸液，旋轉。

　　c、室溫下放置5-10min，使DNA結合在脂質體上。

　　(2)棄去細胞中的舊液，用1ml無血清DMEM洗細胞1次后棄去，向每孔中直接加入1mlDNA-脂質體復合物，37℃培養3-5天。

　　(3)再于每孔中加入含20%胎牛血清的DMEM，繼續培養14-24h。

　　(4)吸出DMEM-DNA-脂質體混合物加入新鮮含10%胎牛血清的DMEM，2ml/孔，再培養24-48h。

　　(5)用細胞刮或消化法收集細胞，以備分析鑒定。

　　二、穩定的lip2000脂質體2000轉染法

　　接種細胞同前述，細胞長至50%板底面積可用于轉染。

　　DNA-脂質體復合物制備轉染細胞同前。

　　在每孔中加入1ml含20%胎牛血清的DMEM，37℃培養48h。

　　吸出DMEM，用G418選擇性培養基稀釋細胞，使細胞生長一定時間，篩選轉染克隆，方法參照細胞克隆篩選法進行。